摘自《宁夏医科大学学报》  作者：丁晓 颜贝 陈杰 高玉婧 王博 单园园 裴秀英

宁夏医科大学生化与分子生物学系/科学技术研究中心/人体解剖与组织胚胎学系

生育力保持教育部重点实验室

内质网是调节生理及病理活动的重要细胞器，当细胞受到缺氧等环境因素改变的刺激或干扰下，没指望稳态被破坏，蛋白质错误折叠导致聚集，钙离子耗竭，脂质合成紊乱等任一现象的发生，将激活相应的信号通路，引发细胞内一系列的反应，成为内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）。本通过观察内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)及ERS抑制剂牛磺熊去氧胆酸钠(TUDCA)对ERS相关标识性蛋白表达水平的影响,建立小鼠卵巢ERS模型。

本研究取4周龄昆明白小鼠卵巢,进行半卵巢培养。实验分组:新鲜对照组,不同浓度TM，诱导组(1、5、10、20、30μg·mL-1),TUDCA+TM组、不同浓度TUDCA(1、2、5、10mM)+TM组。通过免疫组织化学技术观测培养1h卵巢内内质网应激伴侣蛋白GRP78、培养3h后ERS凋亡相关蛋白CHOP的表达水平;TUNEL法检测培养3、6、12、24、36、48h后卵巢细胞凋亡情况。结果与新鲜组相比,TM诱导1h后卵巢发生内质网应激反应,TM浓度为5-10μg·mL-1时GRP78表达水平达到最高(P0.05),之后随TM浓度增加缓慢递减;TM诱导3h后卵巢内ERS凋亡相关蛋白CHOP表达水平在TM 10μg·mL-1处达到最高(P0.05),凋亡细胞数随着培养时间的延长增加。TUDCA抑制ERS实验显示,随着TUDCA浓度的增大,10μg·mL-1TM诱导的GRP78蛋白表达呈递减趋势,其中TUDCA 10mM组GRP78表达水平基本恢复到新鲜组水平。

结论：TM可诱导小鼠卵巢ERS,5μg·mL-1为诱导ERS保护作用浓度,而10μg·mL-1以上则产生ERS途径介导的凋亡。TUDCA可抑制TM诱导的卵巢ERS。该模型的建立对了解卵巢移植或深低温冻存中ERS发生的程度及可能的干预手段的保护效应奠定了基础。